Equine pythiosis in the eastern wetlands of Uruguay / Pitiose equina em áreas úmidas do leste do Uruguai

Equine pythiosis is an ulcerative and granulomatous disease of the skin, caused by the oomycete Pythium insidiosum (Pythiaceae). The objective of this study was to describe seven cases of equine pythiosis that occurred from 2012 to 2017 in the eastern region of Uruguay. Six of the seven cases occurred in the eastern wetland ecosystems of the Merin basin, and the remaining case occurred in the wetland fluvial plains of the Tacuarembó River. Lesions consisted of a large, rapidly growing ulcerated tumor with abundant granulation tissue, serosanguineous secretion, and fistulous tracts containing large concretions or kunkers. The animals presented intense pruritus, claudication and loss of body condition, with death or euthanasia in extremis in six cases. The main histological lesions consisted of an eosinophilic and pyogranulomatous inflammatory process, with numerous foci of eosinophilic necrosis (kunkers), collagenolysis, and a Splendore-Hoeppli reaction. In all cases, silver coloration (Grocott) showed intralesional hyphae compatible with P. insidiosum, which was confirmed by immunohistochemistry in three cases. A horse in the terminal phase of the disease was treated with triamcinolone acetonide (50mg IM every 15 days), and fully recovered after 1 year. It is concluded that equine pythiosis is prevalent in the wetland ecosystems of eastern Uruguay and that treatment with triamcinolone is auspicious.(AU)

Pitiose é uma doença granulomatosa e ulcerativa da pele dos equinos causada pelo oomyceto Pythium insidiosum (Pythiaceae). O objetivo deste trabalho foi descrever sete casos de pitiose equina que ocorreram de 2012 a 2017 na região leste do Uruguai. Seis dos sete casos ocorreram no ecossistema de áreas pantanosas da bacia da bacia da Lagoa Mirim Merin e o restante nas planícies fluviais pantanosas do rio Tacuarembó. As lesões se caracterizaram por tumores ulcerados de crescimento rápido com abundante tecido de granulação, secreção serossanguinolenta e presença de tratos fistulosos contendo material coraloide ou kunkers. Os equinos apresentavam prurido intenso, claudicação e perda da condição corporal e seis morreram ou foram eutanasiados in extremis. As principais lesões histológicas consistiam de um processo inflamatório piogranulomatoso com numerosos focos de necrose eosinofílicos (kunkers), colagenólise e reação de Splendori-Hoepli. Em todos os casos a impregnação pela prata (Grocott) revelou a presença de hifas intralesionais compatíveis com P. insidiosum, o que foi confirmado pela imuno-histoquímica em três casos. Um equino em fase terminal da doença foi tratado com triamcinolona acetonida (50mg, IM, a cada 15 dias), recuperando-se completamente após um ano. Conclui-se que a pitiose é uma enfermidade presente em áreas úmidas na região leste do Uruguai e o tratamento com triamcinolona pode ser uma alternativa promissora.(AU)

Intestinal intussusception secondary to enteritis caused by Pythium insidiosum in a bitch: case report / Intussuscepção intestinal secundária à enterite causada por Pythium insidiosum em uma cadela: relato de caso

We report a case of intestinal intussusception secondary to enteritis caused by Pythium insidiosum infection in a 1-year-old mixed breed bitch that died after a 30-day history of bloody diarrhea, anorexia, weight loss, listlessness, dehydration, and pale mucous membranes. Necropsy revealed two areas of intussusception, one jejunum-jejunal and one ileum-cecum-colic. The first intussusception showed slight congestion of the intestinal loop, which was resolved by manual traction, while the second intussusception exhibited thickening, irregular yellow spots, and transmural congestion. Histologically, the jejunum-jejunal segment had ischemic lesions secondary and ileum-cecum-colic intussusception there was also necrotizing, pyogranulomatous enteritis associated with negative images of intralesional fungal hyphae that were well visualized by silver impregnation. Immunohistochemistry identified the hyphae as Pythium insidiosum. The diagnosis was made based on the histological changes and confirmed by immunohistochemistry. We can conclude that enteritis by P. insidiosum in dogs can occasionally cause intestinal intussusception and result in acute death.(AU)

Relata-se um caso de intussuscepção intestinal secundária à enterite causada por Pythium insidiosusm em uma cadela, sem raça definida, com um ano de idade, que morreu após apresentar 30 dias de diarreia sanguinolenta, anorexia, perda de peso, apatia, desidratação e mucosas pálidas. Na necropsia verificaram-se duas áreas de intussuscepções, sendo uma jejuno-jejunal e outra íleo-ceco-cólica. Na primeira havia discreta congestão, que foi desfeita pela tração manual, e na segunda observou-se espessamento segmentar, focos amarelados irregulares e congestão transmural do intestino. Microscopicamente, no segmento jejuno-jejunal observaram-se moderadas lesões isquêmicas secundárias à intussuscepção, e no segmento íleo-ceco-cólica verificou-se enterite piogranulomatosa e necrosante, segmentar, associada a imagens negativas de hifas intralesionais, impregnadas pela prata. Pela imuno-histoquímica, as hifas foram imunomarcadas para Pythium insidiosum. O diagnóstico foi realizado com base nas características microscópicas das lesões e morfotintoriais das hifas e foi confirmado pela imuno-histoquímica. De acordo com esses dados, é possível concluir que a infecção intestinal por P. insidiosum em cães pode causar intussuscepção e morte.(AU)

Isolamento e caracterização de espécies de Pythium de ambientes aquáticos no Estado do Rio Grande do Sul e avaliação da patogenicidade em modelo experimental / Isolation and characterization of Pythium species from swampy areas in the Rio Grande do Sul, Brazil, and evaluation of pathogenicity in an experimental model

Foram coletadas 186 amostras de água de ambientes pantanosos em 13 municípios das regiões Sul, Central e Oeste do Rio Grande do Sul, Brasil, com o objetivo de isolar e caracterizar espécies de Pythium e avaliar a sua patogenicidade empregando coelhos como modelo experimental. Em 11,8% (n=22) das águas coletadas foram isoladas diferentes espécies de Pythium incluindo: P. insidiosum (n=1), P. catenulatum (n=3), P. pachycaule voucher (n=1), P. rhizo-oryzae (n=3), P. torulosum (n=4) e Pythium spp. (n=10). Zoósporos desses micro-organismos foram produzidos in vitro e inoculados por via subcutânea em coelhos, os quais foram avaliados durante 45 dias. Dentre os oomicetos testados, apenas P. insidiosum evidenciou patogenicidade, causando pitiose no modelo experimental, evidenciando que, em nossas condições, apenas esta espécie de Pythium é patógena para mamíferos.(AU)

One hundred and eighty-six water samples from swampy areas were collected in 13 municipalities of South, Central and West regions of Rio Grande do Sul, Brazil, in order to isolate and characterize Pythium species and assess their pathogenicity using rabbits as experimental model. Different Pythium species were isolated from 22 (11.8%) water samples, including P. insidiosum (n=1), P. catenulatum (n=3), P. pachycaule voucher (n=1), P. rhizo-oryzae (n=3), P. torulosum (n=4) e Pythium spp. (n=10). Zoospores of these microorganisms were produced in vitro and inoculated subcutaneously into rabbits, which were assessed over 45 days. Only P. insidiosum showed pathogenicity, causing pythiosis in the experimental model.(AU)

Pythiosis in dogs in the semiarid region of Northeast Brazil / Pitiose em cães na região semiárida do Nordeste, Brasil

We describe the epidemiological, clinical and pathological features of five cases of pythiosis in dogs in northeast semiarid. The disease occurred in dogs with age between one and three years, females and males of different breeds. The dogs were created in urban areas, but were occasionally taken to the countryside and then had contact with wetlands. The main clinical signs were weight loss, vomiting, diarrhea and tenesmus. Macroscopically there were intestinal wall thickening with irregular firm masses with yellowish granular areas interspersed with a whitish tissue, involving the duodenum, colon and rectum, extending to the lymph nodes and pancreas, and the vagina and liver. In the skin there were areas of alopecia and irregular ulcerations, some containing small cavitations with serosanguineous secretion. Microscopically there were pyogranulomatous inflammation and in one case also there were eosinophilic necrosis associated with negative images tubuliformes by hematoxylin and eosin, strongly stained by GMS and weakly by PAS. Hyphae were strongly marked by immunohistochemistry with polyclonal anti-Pythium insidiosum. The disease occurs sporadically in dogs in the semiarid Northeast, however should be included in the differential diagnosis of chronic diseases and proliferative aspect of the gastrointestinal system, and front skin lesions of difficult treatment.(AU)

Descrevem-se os aspectos epidemiológicos, clínicos e patológicos de cinco casos de pitiose em cães na região semiárida do Nordeste. A doença ocorreu em cães com idade entre um e três anos, fêmeas e machos, de diferentes raças. Os cães eram criados em zona urbana, mas ocasionalmente eram levados para zona rural e tinham contato com áreas alagadas. Em um caso não havia informações no histórico sobre acesso à zona rural. Os principais sinais clínicos observados foram perda de peso, vômito, diarreia e tenesmo. Macroscopicamente havia espessamento da parede do intestino com massas firmes, irregulares, com áreas granulares amareladas entremeadas por tecido esbranquiçado, no duodeno, cólon e reto, que se estendia ao pâncreas e linfonodos, além de fígado e vagina. Na pele havia área de alopecia e ulcerações irregulares, algumas contendo pequenas cavitações com secreção serosanguinolenta. Microscopicamente havia inflamação piogranulomatosa e em um caso também havia necrose eosinofílica associada a imagens negativas tubuliformes pela hematoxilina e eosina, fortemente impregnadas pelo GMS e fracamente coradas pelo PAS. As hifas foram fortemente imunomarcadas pela imuno-histoquímica com anticorpo policlonal anti-Pythium insidiosum. A doença ocorre esporadicamente em cães no semiárido nordestino, entretanto deve ser incluída no diagnostico diferencial das doenças em cães com evolução crônica e proliferativa que acometem o sistema gastrintestinal, e frente a lesões cutâneas de difícil tratamento.(AU)

Pitiose em ovinos nos estados de Pernambuco e Bahia / Pythiosis in sheep from Pernambuco and Bahia States, Brazil

A pitiose é uma doença infecciosa causada pelo oomiceto aquático P. insidiosum que acomete animais e o homem, especialmente habitantes de áreas úmidas. A enfermidade apresenta como característica principal a formação de lesões com aspecto granulomatoso nos hospedeiros. Neste trabalho, relatou-se a ocorrência da pitiose em ovinos nos estados de Pernambuco (PE) e Bahia (BA), Nordeste do Brasil, bem como foi avaliada a eficácia de um imunoterápico frente a esta enfermidade. Amostras de sangue de 53 ovinos foram coletadas, sendo 49 animais oriundos de propriedades localizadas em PE e quatro animais provenientes da BA. Sete ovinos demonstraram sinais clínicos de pitiose ovina. Um dos animais foi submetido à eutanásia e sua cabeça e linfonodo submandibular foram coletados e enviados para análises laboratoriais. Seis ovinos foram submetidos à imunoterapia, sendo mantidos nas instalações do setor de ovinocultura da Univasf/Petrolina-PE durante o tratamento. As técnicas de ELISA, cultura fúngica e reação em cadeia da polimerase (PCR) foram utilizadas como métodos diagnósticos da pitiose ovina, sendo eficientes para confirmação dos casos clínicos no rebanho. Ao exame microscópico do material coletado da cavidade nasal de um animal eutanasiado, observou-se uma área focalmente extensa de necrose com presença de infiltrado difuso de neutrófilos íntegros e degenerados margeando a cartilagem. Somente um animal apresentou cura clínica, indicando uma eficiência no tratamento da pitiose de 16,7% (1/6). O aumento de casos de pitiose tem sido denotado em diversos municípios de PE e da BA. Neste contexto, o emprego do imunoterápico pode ser uma alternativa a ser pesquisada. Portanto, estudos futuros devem ser realizados para investigar o efeito da imunoterapia aplicada à pitiose em ovinos.

Pythiosis is a devastating infectious disease caused by an aquatic oomycete, Pythium insidioum, and affects animals and humans that inhabit wetlands. The disease is characterized mainly by granulomatous lesions in the hosts. The purpose of this study was to report the occurrence of pythiosis in sheep in the states of Pernambuco (PE) and Bahia (BA), Northeastern Brazil, as well as to evaluate the efficacy of an immunotherapic against ovine pythiosis. Blood samples were collected from 53 sheep, 49 from flocks in counties located in PE and four from BA. Seven sheep showed clinical signs of ovine pythiosis; one of them was submitted to euthanasia and its head and submandibular lymph node was collected and sent for histopathologic and mycological analyses. Other six sheep were treated with an immunotherapic. During the treatment the animals were kept in the Sheep Industry Sector facilities at Univasf/Petrolina-PE. ELISA, fungal culture and polymerase chain reaction (PCR) methods were used to confirm the diagnosis of clinical ovine pythiosis in the sheep flock. At microscopic examination of the material collected from the nasal cavity of a sheep euthanized was observed a focally extensive area of necrosis with presence of diffuse infiltration of intact and degenerated neutrophils bordering the cartilage. Only one sheep showed clinical cure, indicating efficiency in the pythiosis treatment of 16.7% (1/6). Ovine pythiosis has been increasing in several municipalities of PE and BA. In this context, the immunotherapy may be an alternative to be searched. Therefore, further studies are needed to investigate the effect of immunotherapy on ovine pythiosis.

Pythium insidiosum: morphological and molecular identification of Brazilian isolates / Pythium insidiosum: identificação morfológica e molecular de isolados brasileiros

Pythium insidiosum is an oomycete belonging to the kingdom Stramenipila and it is the etiologic agent of pythiosis. Pythiosis is a life-threatening infectious disease characterized by the development of chronic lesions on cutaneous and subcutaneous, intestinal, and bone tissues in humans and many species of animals. The identification of P. insidiosum is important in order to implement a rapid and definitive diagnosis and an effective treatment. This study reports the identification of 54 isolates of P. insidiosum of horses, dogs and sheep that presented suspicious clinical lesions of pythiosis from different regions in Brazil, by using morphological and molecular assays. Throughout the PCR it was possible to confirm the identity of all Brazilian isolates as being P. insidiosum.

Pythium insidiosum é um oomiceto pertencente ao Reino Stramenopila e agente etiológico da pitiose, uma doença infecciosa com riscos de morte. A pitiose é caracterizada pelo desenvolvimento de lesões crônicas sobre os tecidos cutâneos, subcutâneas, intestinal e ósseo em humanos e muitas espécies de animais. A identificação de P. insidiosum é importante, a fim de se obter um diagnóstico rápido e definitivo, bem como um tratamento eficaz. Este estudo relata a identificação de 54 isolados de P. insidiosum de cavalos, cães e ovelhas que apresentavam lesões compatíveis e suspeita clínicas de pitiose, provenientes de diferentes regiões do Brasil, através de métodos morfológicos e moleculares. Através da PCR foi possível confirmar a identidade de todos os isolados brasileiros como sendo P. insidiosum.

Exploitation of trichoderma species on the growth of Pythium Aphanidermatum in Chilli

Damping-off of chilli caused by Pythium aphanidermatum is a major nursery disease in vegetables. In vitro experiments evaluated the effect of eight isolates of Trichoderma species (from chilli rhizosphere) were tested against P. aphanidermatum. All the Trichoderma species had varied antagonistic effects against the pathogen. Among them, TVC3 recorded maximum growth inhibition of P. aphanidermatum and produced more amounts of volatile and non-volatile metabolites. The culture filtrate of the Trichoderma isolate TVC3 recorded complete inhibition on the mycelial growth of pathogen at 15 percent concentration. Moreover, chilli seeds treated with culture filtrate of the isolate TVC3 recorded maximum germination percentage, shoot length, root length and vigour index of chilli. The study identified the Trichoderma isolate (TVC3) performed well in inhibiting the mycelial growth of pathogen as well as increased the plant growth in chilli.

Aspectos clínicos, morfológicos e imuno-histoquímicos da pitiose gastrintestinal canina / Clinical Aspects, contouring and immunohistochemistry of pythiosis gastrintestinal diseases of dogs

Através de um estudo retrospectivo dos casos de biópsias e necropsias de cães recebidos no Laboratório de Patologia Veterinária da Universidade Federal de Santa Maria, constatou-se a ocorrência de dois casos confirmados e de quatro casos suspeitos de pitiose gastrintestinal canina. Os dois casos diagnosticados e publicados tiveram a etiologia confirmada através da cultura e indução de zoosporogênese ou por nested-PCR. Neste estudo utilizou-se a técnica de imuno-histoquímica com anticorpo policlonal anti-Pythium insidiosum para confirmação da etiologia dos quatro casos suspeitos. A epidemiologia, sinais clínicos, lesões macroscópicas e microscópicas, características histoquímicas e imuno-histoquímicas e diagnósticos diferenciais são relatados e discutidos.

Four suspect and two confirmed cases of gastrointestinal pythiosis were found in a retrospective study of biopsy and necropsy cases of dogs received in the Laboratório de Patologia Veterinária at the Universidade Federal de Santa Maria. The two diagnosed and published cases have had the etiology confirmed by culture and zoosporogenesis induction or by nested-PCR. On this study, the etiologic diagnosis of four suspect cases was confirmed by immunohistochemistry using anti-Pythium insidiosum policlonal antibody. Epidemiology, clinical signs, gross and microscopic lesions, histochemistry, immunohistochemistry, and differential diagnoses are reported and discussed.

Surto de pitiose cutânea em bovinos / Outbreak of cutaneous pythiosis in cattle

Setenta e seis bovinos, sem raça definida, jovens, de ambos os sexos, apresentaram lesões cutâneas multifocais nodulares, ulceradas e crostosas nas faces medial e lateral dos membros anteriores e posteriores, região ventral do pescoço, esterno e cauda. A doença ocorreu no verão e as lesões foram observadas nas regiões do corpo que ficavam grande tempo em contato com a água em canais de irrigação. Histologicamente observaram-se múltiplos granulomas e piogranulomas contendo escassas imagens negativas de hifas na área central, as quais foram melhor evidenciadas através da técnica de metenamina nitrato de prata de Grocott. O diagnóstico etiológico definitivo foi baseado na técnica de imuno-histoquímica com anticorpo policlonal anti-Pythium insidiosum. Adicionalmente, foi realizado o teste de ELISA indireto. Surtos de pitiose cutânea bovina são incomuns e, particularmente neste relato, todos os animais afetados tiveram cura espontânea das lesões dentro de duas a três semanas.(AU)

Seventy-six young mixed breed cattle of both sexes, presented multifocal ulcerated nodular cutaneous lesions localized in the medial and lateral aspects of fore and hindlimbs, ventral neck, sternum, and tail. The disease occurred during summer and lesions were observed on areas of the body which were in contact with water of irrigation channels for long periods. Histologically, there were multiple granulomas and pyogranulomas with few negative profiles of hyphae, which were better visualized throughout Grocott methenamine silver stain. Definitive etiologic diagnosis was based on immuno-histochemistry with anti-Pythium insidiosum polyclonal antibody. Additionally, an indirect ELISA test was performed. Bovine cutaneous pythiosis outbreaks are uncommon and, particularly as occurred in the cattle of this report, all affected animals had spontaneous healing within two to three weeks.(AU)

Teste de ELISA indireto para o diagnóstico sorológico de pitiose / Indirect ELISA for the serodiagnostic of pythiosis

A pitiose, doença granulomatosa de eqüinos causada pelo oomiceto Pythium insidiosum, tem como característica a evolução rápida seguida de morte dos animais. Estas mortes muitas vezes são causadas por diagnósticos errôneos ou demorados quando os doentes já não respondem ao tratamento. Este trabalho teve por objetivo a padronização do ensaio imunoenzimático indireto (ELISA) para diagnóstico sorológico de pitiose em eqüinos e coelhos, visando a diminuição de erros e de tempo necessário para o diagnóstico. Para o desenvolvimento e validação do teste foram utilizadas 72 amostras de soro de eqüinos saudáveis e 44 soros de eqüinos com pitiose confirmada. Os resultados da validação do ELISA para eqüinos foram: sensibilidade 97,72 por cento, especificidade 90,27 por cento, valor preditivo positivo 86 por cento, valor preditivo negativo 98,4 por cento e eficiência de 93,1 por cento. Para coelhos, o teste foi padronizado com 48 amostras de soro de animais saudáveis e 24 amostras de coelhos imunizados com antígenos de P. insidiosum. Os resultados foram: sensibilidade 91,66 por cento, especificidade 95,83 por cento, valor preditivo positivo 91,66 por cento, valor preditivo negativo 95,83 por cento e eficiência de 94,44 por cento. Os resultados deste trabalho demonstram que o ensaio imunoenzimático indireto é um método seguro e eficaz para o diagnóstico sorológico da pitiose.

Prospección micológica en rizosfera y rizoplano en un vivero forestal de eucalyptus globulus labill en la V región, Chile / Mycological prospection in rhizosphere and rhizoplane at a forest nursery of eucalyptus globulus labill at the V region, Chile

A pesar de que la fumigación-esterilización de los suelos es de utilidad en la producción de los viveros forestales, la microbiota residente puede sufrir alteraciones difíciles de evaluar. Con la finalidad de detectar específicamente las variaciones de la micota y corroborar el manejo sanitario, se efectúo un muestreo en rizósfera y raíces de plántulas de eucalyptus globulus labill (Diciembre 93 a Julio 94), para evidenciar la presencia de patógenos, oportunistas y saprófitos. La metodología, basada en la selección de muestras al azar desde las platabandas, consistió en procesar la rizósfera, en suelos fumigados y esterilizados, mediante diluciones en cultivos sólidos (DCPA) y las raices, en agar agua, previa esterilización superficial y en medios específicos para phytophthora y pythium. Se aislaron un total de 1643 colonias representadas por 40 géneros y 72 especies. En rizósfera, las principales taxa considerados como patógenos u oportunistas, fueron los géneros: aspergillus (12,1 porciento) con frecuencias similares en las tres etapas y fusarium (11,1 porciento) que decayó en la etapa final. En cambio los saprófitos de mayor presencia fueron cladosporium (8,7 porciento), penicillium (8,4 porciento y botryotrichum (6 porciento). En raíz, los principales patógenos integraron los géneros: pythium (sin porcentaje por metodología diferente), fusarium (14,6 porciento) y trichoderma (4 porciento) f.oxysporum (82,5 porciento del total del género), aumentó considerablemente en el segundo y tercer muestreo, mientras t. harzianum, fue siempre dominante (85,9 porciento del total). Los saprófitos fueron representados mayoritariamente por penicillium (16 porciento), ulocladium (9,7 porciento) y acremonium (2,2 porciento). La baja mortalidad observada en las plántulas del vivero durante los muestreos, puede atribuirce en cierta medida a: 1) la acción de los fungicidas empleados, 2) la competencia y antagonismo ejercido por los hongos saprófitos presentes en los suelos muestreados (resistentes a las fumigaciones) y 3) a los taxa "competentes de la rizósfera" como t. harzianum y f.oxysporum, que pueden ejercer un rol importante. Todos estos factores podrían contribuir al control de algunos fitopatógenos detectados principalmente en las raíces tales como: pythium altimun, alternaria alternata, phoma leveillei. Las variaciones de las poblaciones fúngicas en los suelos de viveros fumigados, deben evaluarse mediante controles periódicos en el tiempo

Evaluation of soil microorganisms with inhibitory activity against rhizoctonia solani causal agent of the damping-off of canola

Pre-and post-emergence damping-off of canola seedlings caused by Rhizoctonia solani is a serious disease in Western Canada. Other fungi such as Fusarium spp. and Pythium spp. are also related to seedling damping-off. To-day, the search of soil bacteria is becoming a tool to use microorganisms as potential biocontrol agents for several plant diseases. The purpose of this research was to detect bacteria to biologically control R. solani, Pyrhium spp., and Fusarium spp. Soil samples were collected throughout Alberta during 1987 to isolate bacteria. Canola seedlings were also used to obtain bacteria from the same samples. Plant pathogenic fungi were tested to detect the antagonistic activity of the isolates. Tests were made with coated canola seeds, amendments and fresh of freeze-dried cells. Three hundred forty-one bacterial cultures were isolated. Only 16 inhibited fungal growth: 7 showed the same effects against R. solani and 9 showed uneven effects. Some isolates showed a weak action to Pythium spp. and Fusarium spp. three isolated showed inhibitory effect on R. solani and Pythium spp. isolate F1 improved by about 50% the germination of canola seeds in inoculated pots when compared with the inoculated control. Coated seeds had low germination and emergence was below the inoculated control. the emergence of vanola seedlings was very much improved when isolate 147 was delivered as an amendment in inoculated pots. Identification showed that 3 bacterial belonged to Bacillus spp., 4 to green fluorescent Pseudomonas spp. and 2 were Streptomyces spp